微流控芯片系統(tǒng)裝置可以實(shí)現(xiàn)高通量并行化的實(shí)驗(yàn)以及多種操作單元的功能一體化,作為一種新的方法學(xué)平臺,已經(jīng)越來越多地應(yīng)用于化學(xué)和生命科學(xué)的研究中。單元操作主要包括進(jìn)樣、樣品處理、混合、反應(yīng)及分離等。
一、進(jìn)樣及樣品前處理單元
利用芯片平臺處理樣品,需要將樣品引入芯片的樣品處理通道或通道網(wǎng)絡(luò),該步驟通常稱為進(jìn)樣。進(jìn)樣通常又可分為上樣和取樣兩個(gè)步驟。芯片實(shí)驗(yàn)室處理的對象是流體,液態(tài)樣品進(jìn)樣是芯片進(jìn)樣的主流,實(shí)際操作中主要有向樣品處理通道內(nèi)引入樣品區(qū)帶、引入樣品液滴和引入持續(xù)樣品流3種情形。區(qū)帶進(jìn)樣又分為單通道輔助進(jìn)樣、多通道輔助進(jìn)樣和激光輔助進(jìn)樣。
二、微混合和微反應(yīng)單元
混合是一個(gè)物理過程,其目的是實(shí)現(xiàn)參與過程的不同組分的均一分布。溶質(zhì)混合有兩種機(jī)理:一種為對流傳質(zhì),另一種為擴(kuò)散傳質(zhì)。微混合技術(shù)具有以下特點(diǎn):① 混合效率高,時(shí)間短,能耗少;② 易于控制,傳質(zhì)及傳熱性能好;③ 設(shè)備結(jié)構(gòu)簡單,容易與其它功能單元集成。根據(jù)輸入能量的不同,將微混合器分為被動式和主動式兩類。被動式微混合器單純地利用幾何形狀或流體特性產(chǎn)生混合效果,除驅(qū)動流體流動的壓力、電滲驅(qū)動等,混合不借助于其它外力,混合器中也不含任何可移動部件,由此又可分為并行迭片、串聯(lián)迭片、混沌對流和液滴微混合器等。而主動式微混合器則借助磁力、電場力及聲場等外力實(shí)現(xiàn)混合。
微反應(yīng)技術(shù)是一種將微結(jié)構(gòu)的內(nèi)在優(yōu)勢應(yīng)用到化學(xué)反應(yīng)過程的技術(shù),體現(xiàn)這種技術(shù)的設(shè)備或器件被稱為微反應(yīng)器。微反應(yīng)器是一種單元反應(yīng)界面尺度為微米量級的微型化學(xué)反應(yīng)系統(tǒng)。它的基本特征是線性尺寸小、物理量梯度高、表面積/體積比大以及流動為低雷諾數(shù)層流,其優(yōu)點(diǎn)是可通過并行單元來實(shí)現(xiàn)柔性生產(chǎn)、規(guī)模放大、快速和高通量篩選等,與常規(guī)反應(yīng)器相比,微流控芯片反應(yīng)器傳質(zhì)傳熱較快,反應(yīng)條件(如溫度、pH值等)易控制。
圖1. 放射性藥物合成所用微芯片示意圖
三、微分離單元
早期的微流控芯片是一種集成化的微分離器件,在芯片上進(jìn)行電泳的研究仍然是微流控領(lǐng)域的主流之一,而電泳分離占有極為特殊的地位。需要強(qiáng)調(diào)的是,微流控芯片所涉及的分離只是芯片眾多功能操作單元中的一種,盡管很多時(shí)候它還會被單獨(dú)使用。
介電泳技術(shù)可作為前置分離技術(shù),集成在其它檢測系統(tǒng)中來提高檢測的靈敏度。Lapizco-Encinas等采用傳統(tǒng)的刻燭微加工方法,在玻璃片上加工出多個(gè)絕緣柱,利用絕緣直流介電泳同時(shí)實(shí)現(xiàn)活體和死亡細(xì)菌的富集以及分離。由于經(jīng)加熱致死的大腸桿菌的電導(dǎo)率比活體大腸桿菌大,受到的負(fù)介電泳力則較小,因此通過施加不同的電壓,可首先實(shí)現(xiàn)活體大腸桿菌的捕集。隨著電壓的增加,可繼而捕集死亡的大腸桿菌。該系統(tǒng)可實(shí)現(xiàn)樣品高達(dá)3000倍富集,分離效率為100%。Pysher和Hayes在PDMS微流控芯片上加工出尺寸規(guī)律變化的鋸齒狀微結(jié)構(gòu)。當(dāng)在通道兩端施加直流電后,會在鋸齒處產(chǎn)生不均勻電場,電場強(qiáng)度在樣品流動方向上規(guī)律性變化。該結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)可同時(shí)使樣品受三種電動力的作用:電泳力、電滲流拖拽力和介電泳力。當(dāng)這三個(gè)力在生物體運(yùn)動方向平衡時(shí),生物體就會被捕集在鋸齒附近;當(dāng)介電泳力較小時(shí),生物體則會在電泳和電滲流作用下隨溶液流走。由于同樣電場強(qiáng)度條件下,活體生物與死亡的生物體因所受介電泳力不同,從而實(shí)現(xiàn)在通道的不同位置分別收集活體和死亡的枯草桿菌、大腸桿菌和表皮葡萄球菌(S.epidermidis)。
介電泳技術(shù)實(shí)現(xiàn)了細(xì)菌和病毒的分離和定量研究。Balasubramanian采用微流控芯片裝置,實(shí)現(xiàn)了自來水中目標(biāo)細(xì)菌的捕集。該研究使用大腸打菌、沙門氏菌(Salmonella)和海洋細(xì)菌(Pseudomonas sp)以及兩種病毒來評價(jià)裝置的工作性能。研究結(jié)果表明:在電場強(qiáng)度分別為67 V/cm和 84V/cm條件下,可分別得到90%和99%的捕集效率。
基于Sanger末端中止法的陣列毛細(xì)管電泳是第一代DNA測序儀所采用的主流技術(shù)。基于微流控芯片大規(guī)模集成的特點(diǎn),加州大學(xué)伯克利分校的Mathies等設(shè)計(jì)了一種96通道微陣列電泳微流控芯片,使高通量的DNA 測序第一次得以在微流控芯片上實(shí)現(xiàn)。該芯片采用了轉(zhuǎn)角蜿蜒設(shè)計(jì),有效分離管道的長度16cm,增加了一次電泳分析的可讀片斷長度,極大地提高了分析的通量。
美國哈佛醫(yī)學(xué)院的Toner課題組在微流控芯片上從未經(jīng)任何處理的全血中分離出了循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cell)。該芯片采用硅基片,加工出了密集的微立柱,用表面化學(xué)的方法在硅基片上修飾了腫瘤細(xì)胞抗體EpCAM。當(dāng)全血流經(jīng)芯片時(shí),由于細(xì)胞與基底的結(jié)合力使循環(huán)腫瘤細(xì)胞被分離出來以便進(jìn)一步檢測。他們用該芯片成功地從117例患有前列腺癌、乳腺癌、肺癌、胰腺癌、結(jié)腸癌的患者的全血中分離檢測到了116 例樣品中的循環(huán)腫瘤細(xì)胞,檢出率達(dá)到99%。
密西根大學(xué)的Takayama實(shí)驗(yàn)室提出了一種在微流控芯片上簡單分離有活力精子的方法。該方法利用微通道中流體所特有的層流的性質(zhì),在Y 形分叉的一個(gè)分支中加入精子樣品,在另一個(gè)分支添加緩沖溶液。由于層流作用,這兩股流體在通過合并管道后,除少量擴(kuò)散外不會有其他因素促進(jìn)混合,因此絕大多數(shù)沒有活力的精子細(xì)胞會平直地流出,而有活力的精子由于自身的游動會從原有的流層中游出,“主動擴(kuò)散”到相鄰的緩沖液層。該芯片構(gòu)造極為簡單,無須外界注射泵等外源能量的介入,利用表面張力和重力將待測樣品從入口一端泵到出口,而有活力的精子在出口有效富集(圖2)。
圖2. 活力精子細(xì)胞分選的原理示意圖