據(jù)麥姆斯咨詢報(bào)道，多年來(lái)，科學(xué)家們一直缺乏合適的實(shí)驗(yàn)工具用于植物細(xì)胞生物力學(xué)的研究。設(shè)計(jì)用于封裝單個(gè)細(xì)胞的微流控裝置市場(chǎng)已經(jīng)被證實(shí)在動(dòng)物研究中擁有巨大的優(yōu)勢(shì)，現(xiàn)在也在植物生物學(xué)領(lǐng)域顯現(xiàn)出巨大的潛力。來(lái)自佛蒙特大學(xué)（University of Vermont）植物生物學(xué)系的研究人員正在利用這項(xiàng)技術(shù)加強(qiáng)對(duì)生物力學(xué)的研究，將原生質(zhì)體封裝到瓊脂糖凝膠中去，以精確控制單個(gè)植物細(xì)胞的物理微環(huán)境。
盡管細(xì)胞和組織力學(xué)在植物發(fā)育中的意義早已得到認(rèn)可，但對(duì)植物細(xì)胞生物力學(xué)的研究仍舊存在挑戰(zhàn)。纖維素細(xì)胞壁的普遍存在和質(zhì)外體連續(xù)性賦予植物組織獨(dú)特的機(jī)械耦合水平。從理論上講，能夠幫助植物組織在多細(xì)胞距離上精確、瞬間傳遞應(yīng)力-機(jī)械信息。然而，質(zhì)體外連續(xù)性也使得單個(gè)細(xì)胞水平上的響應(yīng)解釋和機(jī)械變量的分離成為問(wèn)題。
現(xiàn)在可以使用復(fù)雜的工具來(lái)研究植物的基因結(jié)構(gòu)和亞細(xì)胞過(guò)程，但是在細(xì)胞水平上研究植物生物力學(xué)則少之又少。科學(xué)家們?cè)噲D在受控機(jī)械環(huán)境下研究植物結(jié)構(gòu)，例如，通過(guò)光彈性建模，但這并不容易，因?yàn)槿魏谓M織水平的介入都會(huì)干擾系統(tǒng)的應(yīng)力機(jī)制。科學(xué)家們也嘗試用高速視頻顯微照相術(shù)來(lái)進(jìn)行應(yīng)力釋放實(shí)驗(yàn)，但是也非常難解釋。液滴微流控的曙光為操縱單個(gè)細(xì)胞的新方法打開(kāi)了大門，將它們捕獲在各向同性和同質(zhì)的機(jī)械環(huán)境中，在這種環(huán)境下可以更有效地隔離變量。一旦封裝在水凝膠珠子中，細(xì)胞與受物理影響的相鄰細(xì)胞隔離，并且可以受機(jī)械力控制。
利用植物細(xì)胞生物力學(xué)的新方法
植物生物學(xué)系的早期研究主要集中在通過(guò)均質(zhì)油和水來(lái)人工生產(chǎn)液滴乳液，但成效有限。在開(kāi)發(fā)投入商業(yè)使用的微流控液滴系統(tǒng)（Dolomite Microfluidics）之前，研究人員會(huì)繼續(xù)評(píng)估使用壓力驅(qū)動(dòng)的霧化過(guò)程以生成液滴流，該系統(tǒng)能夠可靠且可重復(fù)地將單個(gè)細(xì)胞封裝在水凝膠珠子中。該系統(tǒng)允許植物生物學(xué)系采用新方法研究植物細(xì)胞生物力學(xué)，并將活的植物原生質(zhì)體封裝在精確尺寸的球形水凝膠珠子中。
原生質(zhì)體的分離和封裝
細(xì)胞壁不是均勻的各向同性環(huán)境。自然結(jié)構(gòu)化的一致取向使細(xì)胞成為細(xì)長(zhǎng)條狀，限制其生長(zhǎng)。在封裝之前，從懸浮培養(yǎng)系統(tǒng)中除去細(xì)胞，并使用酶解除去細(xì)胞壁，由此除去生長(zhǎng)物理屏障。產(chǎn)生的球形原生質(zhì)體不具備包含細(xì)胞壁的天然細(xì)胞內(nèi)在極性，可用于液滴封裝。
使用具有雙試劑、四通道玻璃連接芯片的微流控液滴系統(tǒng)生成瓊脂糖微珠
合成流體-礦物油加表面活性劑（連續(xù)相），培養(yǎng)基和瓊脂糖中活的原生質(zhì)體（分散相）被送入液滴芯片，瓊脂糖和原生質(zhì)體接觸，并在持續(xù)流動(dòng)的礦物油交叉處立即裂解成液滴。液滴直徑通過(guò)調(diào)節(jié)不同相的流速來(lái)進(jìn)行控制，產(chǎn)生單分散瓊脂糖液滴流，使微芯片進(jìn)入冷卻的礦物油浴內(nèi)，并在此固化。從油中分離后，將微珠懸浮在培養(yǎng)基中，用于實(shí)驗(yàn)研究以調(diào)查植物細(xì)胞生物力學(xué)，例如，細(xì)胞支架的變化響應(yīng)受控機(jī)械載荷的應(yīng)用。
打造堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)
最初的結(jié)果表明該技術(shù)有可能是支持植物生物力學(xué)研究的新方法，一秒內(nèi)生成130個(gè)大小一致的球形水凝膠珠子，并產(chǎn)生具有良好細(xì)胞活力的單個(gè)原生質(zhì)體的封裝。該物理系的研究人員正在著手進(jìn)行下一階段的開(kāi)發(fā)，優(yōu)化該過(guò)程以提高細(xì)胞存活率并加強(qiáng)瓊脂糖微珠。實(shí)現(xiàn)一致的細(xì)胞存活率是一大特別的挑戰(zhàn)，因?yàn)闆](méi)有細(xì)胞壁，原生質(zhì)體將變得特別脆弱。為了改善這一情況，實(shí)驗(yàn)室目前正在試驗(yàn)不同的油/表面活性劑組合和一種親氟微流控芯片。同時(shí)，該團(tuán)隊(duì)正在尋找改變水凝膠珠子表面以提高抗張強(qiáng)度的方法。通常，隨著封裝細(xì)胞的生長(zhǎng)，它們最終會(huì)通過(guò)瓊脂糖微珠破裂，加固微珠則可能會(huì)使發(fā)育中的細(xì)胞受到約束。解決上述問(wèn)題的辦法之一是將聚合電解質(zhì)涂層疊加到水凝膠表面，生成可以滲透氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的微珠，其強(qiáng)度也足以抵抗細(xì)胞內(nèi)可能產(chǎn)生的高細(xì)胞膨壓。
前景光明
雖然微流控裝置已經(jīng)成功用于動(dòng)物細(xì)胞的封裝，但直到最近才將這項(xiàng)技術(shù)應(yīng)用于植物生物學(xué)領(lǐng)域。在植物生物學(xué)領(lǐng)域，佛蒙特大學(xué)是該技術(shù)的早期采用者，并證明了微流控封裝的潛力，以支持研究植物生物力學(xué)的新方法，允許生成大小一致的球形水凝膠微珠，并封裝具有良好細(xì)胞活力的單個(gè)原生質(zhì)體。該系目前正基于取得的初步成功，優(yōu)化流程并嘗試進(jìn)一步改善液滴微流控應(yīng)用于植物細(xì)胞生物學(xué)的方法。
（文章來(lái)源:微信公眾號(hào) 微流控 轉(zhuǎn)載僅供參考學(xué)習(xí)及傳遞有用信息，版權(quán)歸原作者所有，如侵犯權(quán)益，請(qǐng)聯(lián)系刪除）